灵芝多糖测定实验
灵芝是一种常用的中国材,历史悠久,被认为具有很多保健作用。其中的主要功能成分是灵芝多糖。因此,测定灵芝多糖含量是判断灵芝品质的重要指标之一。下面简单介绍灵芝多糖测定实验方法与步骤。
实验仪器与试剂
所需仪器:恒温水浴器、离心机、紫外分光光度计等。
所需试剂:酚-硫酸试剂、含氯酸试剂、硫酸、乙醇等。
实验步骤
步骤一:样品制备
取适量灵芝菌体,用清水洗净,切成细小块。将切好的灵芝用乙醇-水混合液浸泡,浸泡时间为2小时。之后,离心分离液体,取出沉淀,再用清水清洗干净。将干燥的灵芝菌体样品粉碎成粉末备用。
步骤二:制备灵芝多糖提取液
将灵芝菌体粉末加入100 mL含氯酸,80°C加热1 h。加入固体硫酸,继续加热1 h。之后,用水稀释待用。
步骤三:测定总多糖含量
将已知质量的灵芝多糖提取液溶液干燥至恒定重量,待冷却后加入酚-硫酸试剂,用紫外分光光度计测量在490 nm处的吸光度。以葡聚糖为标准品计算每克样品的总多糖含量。
步骤四:测定多糖分子量
用高速离心法将提取多糖的溶液离心。将得到的沉淀溶于少量水中,通过光度计测定在492 nm处的吸光度并记录。在测量此前,需用高速/低速滤膜过滤分别约1 mL的多糖溶液并测定滤液的吸光度。通过前后两次高速/低速滤膜过滤后滤液的吸光度计算多糖的平均分子量。多糖分子量高低,一定程度上可以反映出灵芝多糖的质量高低。
结语
以上是测定灵芝多糖的简单实验方法与步骤。需注意的是,在进行灵芝多糖测定实验时要注意实验过程中用具的洁净程度,以免实验误差。
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